Técnicas de Análisis

- Microextracción en fase líquida  (LMPE)-

La microextracción líquido- líquido (LPME) se basa en el reparto favorable que experimenta un analito que se encuentra en una muestra (fundamentalmente de naturaleza acuosa) hacia un disolvente que se elige como extractante (que debe ser inmiscible en agua si el disolvente se pone en contacto directo con la muestra acuosa) requiriendo cantidades del mismo del orden de microlitros (normalmente volúmenes inferiores a los 500 µL). En su vertiente más clásica hace uso de disolventes orgánicos convencionales como medio de extracción.

👉La microextracción en fase líquida (LPME) puede realizarse de diversos maneras, en el presente trabajo investigativo se ha empleado la siguiente:

-Microextracción asistida por membrana-

En esta modalidad de microextracción las dos fases están en sendos compartimentos separadas mediante una membrana polimérica hidrofóbica porosa, normalmente de Politetrafluoroetileno (PTFE) o polietileno. 

Mecanismo:

• Inicialmente, la extracción tiene lugar en la boca de un poro en contacto con la fase acuosa.

• A continuación, por difusión pasiva, los analitos extraídos tenderán a migrar hacia la otra cara de la membrana, desde donde acceden al compartimento que contiene el disolvente orgánico.

El disolvente orgánico accede fácilmente al interior de los poros, donde permanece relativamente retenido por fuerzas capilares, impregnando completamente la membrana. Y así, el disolvente orgánico contacta con la fase acuosa que ocupa el otro compartimento, a través de dicha interfase tiene lugar la extracción de analitos según su correspondiente constante de distribución. (Listorti, 2014)

👉Existen varias configuraciones que permiten llevar a cabo la microextracción asistida por membrana de forma eficiente. En este artículo se utilizó específicamente la microextracción en fibra hueca (hollow fiber liquid-phase microextraction, HF-LPME)

-Microextracción en fibra hueca-

La microextracción en fibra hueca (HF - LPME) es un método alternativo a la micro extracción de fase liquida (LPME), desarrollado por Pedersen-Bjergaard y Rasmussen en 1999, esto se basa en el uso de fibras huecas como soporte para la fase orgánica inmiscibles con una fase acuosa que contiene el analito. Utilizan membranas tubulares (denominadas fibras huecas), de varios centímetros de longitud y diámetros del orden de décimas de milímetros (mm). se introduce dentro de la fibra hueca el disolvente orgánico (del orden de 20 – 50 µL) mediante una microjeringa. Se sumerge dentro de la muestra acuosa, que normalmente se mantiene en agitación, para facilitar la cinética de la extracción. Transcurrido el tiempo de extracción predeterminado (del orden de varias horas), con la misma microjeringa se recupera la fase orgánica y se analiza, normalmente por cromatografía.

Se considera que es la mejor técnica para la OTA porque es simple y económica, con la ventaja que la fibra es desechable después de su uso debido a su bajo costo. Los analitos desionizados en solución acuosa se extraen de la solución de muestra, entrando en el solvente orgánico incluido en los poros de la fibra hueca, y más hacia el interior de la fibra hueca que contiene un pequeño volumen de una solución de aceptor.

• La técnica proporciona extractos muy limpios.

-Cromatografía líquida con detección de fluorescencia-

La cromatografía de líquidos de alto rendimiento (HPLC, de high-performance liquid chromatography) no está limitada por la volatilidad o la estabilidad térmica de la muestra. Es un tipo de cromatografía en columna en el que por acción de una bomba, se hace pasar una mezcla de analitos en un sistema disolvente comúnmente conocido como fase móvil.

La fase móvil pasa  a través de una columna cromatográfica, que contiene la fase estacionaria a un flujo especificado. La separación de los compuestos ocurre en base a la interacción de éstos con la fase móvil y la fase estacionaria.

Se complementó la cromatografía con detector de fluorescencia

Detector de fluorescencia (FL): son muy sensibles, selectivos y con alta especificidad. Donde el analito emite un haz de luz que se dirige a un filtro o monocromador, que selecciona la longitud de onda emitida, haciendo que se enfoque en el fotodetector. (A3 Consultoría Analítica)

Se considera que la técnica de estudios es HPLC con detección de fluorescencia, es la mejor porque se aplica en análisis de HPAs, aminoácidos, micotoxinas, esteroides, vitaminas, aditivos y colorantes alimentarios. Es la mejor principalmente porque una se puede alcanzar el límite de detección bajo, debido al hecho de que OTA tiene fluorescencia natural.