Metodología

 -Metodología para reportar resultados- 

Para la obtención de buenos resultados los disolventes utilizados como fases donante y aceptora fueron seleccionados teniendo en cuenta las características fisicoquímicas del analito. 

La OTA tiene características ácidas débiles con dos valores de pKa por sus características moleculares. El valor de pKa para el grupo carboxilo de la fenilalanina es de 4.4, mientras que el pKa del grupo hidroxilo fenólico es de 7.3–7.05. Esto quiere decir que es ligeramente soluble en soluciones acuosas y soluble tanto en disolventes orgánicos. Por lo tanto, el pH de la solución donante (vino) debe ajustarse dentro del rango ácido para desionizar la molécula y para promover su extracción.

Solo el 1-octanol ha proporcionado buenos resultados. El 1-octanol mostró el factor de pre- concentración más grande: 34 (R.S.D.= 16%, n = 4) cuando ponemos 25 l en la fibra como fase aceptora.

El tiempo de extracción adecuado

Se extrajeron tres muestras de vino enriquecido (2,5 ng / ml) durante 0,5-4 horas a

temperatura ambiente con agitación constante a velocidad de 1000 rpm. Dos horas fue

tiempo suficiente para extraer la máxima cantidad de OTA. Los tiempos de extracción

mayores a dos horas no dieron resultados a un mejor factor de pre-concentración.

-Resultados finales de la extracción-

A partir de los experimentos realizados se obtuvo la eficiencia de extracción óptima de OTA del vino mediante el uso de una fibra porosa de 4,0 cm de largo, vino acidificado a pH 1,05 con HCl como fase donante y 15 l de 1-octanol en el lado de la fibra como fase aceptora. El 1-octanol también se ha utilizado como disolvente para la impregnación de los poros de la fibra. El tiempo de extracción fijado fue de 2 h, con una velocidad de agitación de 1000 rpm. 1-Octanol (dentro de la fibra e inmovilizado en el poro de la fibra) se recogió mediante sonicación en metanol. El extracto se evaporó y se resuspendió en 200 l de fase móvil antes del análisis por HPLC. En la siguiente imagen se muestra un cromatograma obtenido de una muestra de vino rosado enriquecido con 1 ng/ml.

Estructura química de la OTA y cromatograma obtenido a partir 

de una muestra de vino de rosa fortificado a 1 ng/ml de OTA.

-Validación del método de acuerdo a los resultados obtenidos-

Los valores de recuperación obtenidos son homogéneos en los tres tipos de vino, y entre las concentraciones de OTA ensayadas (R.S.D.= 0,3%) (Tabla 1). Finalmente, el mismo porcentaje de recuperación se logró en ambos días y experimentos de recuperación de 1 día 77%. Este valor es aceptable para la cuantificación de OTA en vino.